Yoon S, Kang K, Cho YD, Kim Y, Buisson EM, Yim JH, Lee SB, Ryu KY, Jeong J, Choi D
РЕЗЮМЕ
Недавно несколько исследователей сообщили, что прямые методы перепрограммирования могут использоваться для дифференциации фибробластов в гепатоцитоподобные клетки без плюрипотентной промежуточной стадии. Однако использование вирусных векторов для конверсии по-прежнему создает важные проблемы с точки зрения интеграции генома. Здесь мы предлагаем новый метод прямого преобразования без интеграции генома с потенциальными клиническими применениями. Чтобы генерировать гепатоцитоподобные клетки, мРНК, кодирующая печеночные транскрипционные факторы Foxa3 и HNF4α, трансфицировали в эмбриональные фибробласты мыши. Через 10-12 дней фибробласты превращались в эпителиальную морфологию и генерировали колонии гепатоцитоподобных клеток (R-iHeps). Сгенерированные R-iHeps экспрессировали специфичные к гепатоцитам маркерные гены и белки, включая альбумин, альфа-фетопротеин, HNF4α, CK18 и CYP1A2. Для оценки печеночной функции оценивали поглощение индоцианинового зеленого вещества, периодическое окрашивание кислотой-Шиффом и секрецию альбумина. Кроме того, mCherry-положительные R-iHeps были привиты в печени мышей Alb-TRECK / SCID, и мы подтвердили экспрессию фермента FAH в моделях Fah1RTyrc / RJ. В заключение наши данные свидетельствуют о том, что неинтегрирующий метод с использованием мРНК имеет потенциал для клеточной терапии.
Полный текст:
dx.doi.org
www.ncbi.nlm.nih.gov
assays.cancer.gov
antibodies.cancer.gov